（1）分析色譜的(dí)目(mù)的，是分析(xī)出混(hùn)合物(wù)中(zhōng)一(yī)個（或(huò)者(zhě)幾(jī)個(gè)）純物質(zhì)的含(hán)量。製備色(sè)譜的目的，是從混(hùn)合物(wù)中得(dé)到純物質。為了(liǎo)加快分離(lí)的時(shí)間(jiān)與提高(gāo)分(fēn)離(lí)的效率(shuài)，製(zhì)備色(sè)譜的的(dí)進(jìn)樣(yàng)品量很(hěn)大(dà)，導致製(zhì)備(bèi)色譜(pǔ)柱子的分離(lí)負荷(hé)的(dí)相(xiāng)應加(jiā)大(dà)，也就(jiù)必須加大(dà)色(sè)譜柱(zhù)填(tián)料，增(zēng)大(dà)製(zhì)備色譜的(dí)直(zhí)徑和(hé)長(cháng)度，使用(yòng)的(dí)相對多(duō)的(dí)流動相。
（2）樣品的前處理：
（3）製備色譜柱的材質及(jí)其特點
（4）固定相的(dí)選擇：
（5）裝柱(zhù)方法的(dí)選(xuǎn)擇根據(jù)固(gù)定相顆(kē)粒度(dù)和柱子的(dí)尺寸(cùn)，采(cǎi)用不同的(dí)裝柱方法，往(wǎng)往裝(zhuāng)填越(yuè)好分離效果(guǒ)越好。
製備(bèi)液相色譜中(zhōng)，有(yǒu)三個可以觀(guān)察到的狀(zhuàng)態(tài)：柱壓，檢測器基綫(xiàn)，譜(pǔ)圖。通(tōng)過觀(guān)察和記錄(lù)這三個(gè)狀(zhuàng)態可(kě)以監測儀(yí)器是否(fǒu)正常。若某(mǒu)個狀態出(chū)現異常(cháng)，故障排(pái)查(chá)和(hé)解決(jué)方案如下(xià)。
1，柱壓(yā)波動
1）吸液管路進氣(qì)泡(pào)①溶劑不足，吸濾頭吸入空(kōng)氣，添加溶劑(jì)並(bìng)排(pái)氣(qì)泡(pào)。②吸濾(lǜ)頭髒(zàng)了或堵(dǔ)塞(sāi)，用(yòng)異丙(bǐng)醇（或(huò)5%稀硝酸）清(qīng)洗(xǐ)。③溶劑中有氣泡（尤(yóu)其兩(liǎng)種(zhǒng)以上溶(róng)劑混合），超(chāo)聲（或抽濾）脫(tuō)氣。
2）泵流(liú)量不穩①單向(xiàng)閥堵塞(sāi)，大流速(sù)，若不(bù)能解(jiě)決，則需拆(chāi)下單(dān)向閥（異丙(bǐng)醇）超聲(shēng)清(qīng)洗(xǐ)清洗(xǐ)或更換(huàn)單向閥(fá)。②柱塞密(mì)封圈磨損，更(gēng)換(huàn)密封圈。③泵(bèng)頭汙(wū)染，柱塞(sāi)杆往(wǎng)復(fù)活動受阻，清(qīng)洗(xǐ)泵頭(tóu)。
3）柱床(chuáng)塌(tā)陷，維修或(huò)更(gēng)換色譜柱(zhù)。
4）流動相(xiāng)混(hùn)合後吸(xī)放熱導致溫度(dù)變化(huà)，以(yǐ)致柱(zhù)壓波(bō)動，如(rú)乙(yǐ)腈和水混(hùn)合(hé)吸(xī)熱，甲醇(chún)和水混(hùn)合放熱。若(ruò)影響(xiǎng)實驗(yàn)結果(guǒ)，則增加(jiā)柱(zhù)溫(wēn)箱(xiāng)或流(liú)動(dòng)相(xiāng)預混(hùn)。
2，柱壓升高或(huò)超壓(yā)。逐段(duàn)排(pái)查(chá)堵(dǔ)塞(sāi)的位(wèi)置：
1）先拆下色(sè)譜柱(zhù)，接(jiē)上兩(liǎng)通運行(háng)，若是(shì)色譜(pǔ)柱(zhù)堵塞(sāi)：①進(jìn)樣後(hòu)樣(yàng)品析出，用合適(shì)的溶(róng)劑(jì)反衝(chōng)色(sè)譜柱。②緩(huǎn)衝(chōng)鹽析出(chū)，用(yòng)大(dà)比例水(shuǐ)相(xiāng)的流(liú)動相衝(chōng)洗色(sè)譜柱。③機械(xiè)雜質堵塞篩(shāi)板，異(yì)丙(bǐng)醇小流(liú)速(sù)反(fǎn)衝色(sè)譜柱。④色譜(pǔ)柱汙染嚴(yán)重(zhòng)，需維修或充填(tián)。
2）混(hùn)合(hé)器堵塞，維(wéi)修或(huò)更(gēng)換。
3）六通(tōng)閥堵塞，將(jiāng)泵液(yè)管路接到(dào)連(lián)接色(sè)譜柱的閥口處，將閥(fá)扳至load狀(zhuàng)態，用易(yì)溶樣品的溶劑小(xiǎo)流(liú)速(sù)衝(chōng)洗(xǐ)。4）壓(yā)力傳(chuán)感器故障(zhàng)，維修或(huò)更(gēng)換。
3，檢(jiǎn)測器基(jī)綫(xiàn)波(bō)動
1）基綫有規律波動(dòng)，且(qiě)幅度較(jiào)大，則可能(néng)有氣泡持(chí)續進入流(liú)通池。排查氣(qì)泡來源並(bìng)用(yòng)異(yì)丙醇衝洗(xǐ)檢(jiǎn)測(cè)器(qì)或色譜(pǔ)柱(zhù)。
2）基綫小幅度規律波(bō)動(dòng)，可能(néng)是檢測(cè)器燈(dēng)能量(liáng)不足（能量下(xià)降後，低波長下靈敏度(dù)先(xiān)下降。
3）基(jī)綫漂(piāo)移(yí)。①流(liú)動相(xiāng)在此檢測(cè)波(bō)長(cháng)下有吸收(shōu)。更換流動相或改(gǎi)變波長。②色(sè)譜(pǔ)柱(zhù)或檢測池汙染。以(yǐ)異丙(bǐng)醇衝(chōng)洗色譜(pǔ)柱或檢(jiǎn)測池，或將檢測(cè)池中透(tòu)鏡玻(bō)片取出清洗(xǐ)。
4，譜(pǔ)圖重現性(xìng)差1）檢(jiǎn)查方法設(shè)置(zhì)，包(bāo)括流速(sù)，梯度，波長(cháng)。
2）檢查流動(dòng)相(xiāng)配置是否有誤(wù)，A，B兩(liǎng)相(xiāng)是否(fǒu)放(fàng)反(fǎn)。
3）檢(jiǎn)查柱壓(yā)與(yǔ)之前是否有(yǒu)差異，若有(yǒu)變化(huà)，則(zé)前麵1和2進(jìn)行排查。
4）進樣前色(sè)譜(pǔ)柱(zhù)是否(fǒu)*平(píng)衡好(hǎo)。
5）樣(yàng)品溶解(jiě)方法。
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