蛋白層析(xī)柱的基本(běn)原(yuán)理是(shì)將一份蛋(dàn)白(bái)質混合物分(fēn)成很(hěn)多(duō)小(xiǎo)份，從而(ér)使某(mǒu)些(xiē)組(zǔ)分中目(mù)標(biāo)蛋(dàn)白的濃度通(tōng)過濃(nóng)縮(suō)得(dé)以(yǐ)增(zēng)大(dà)。雖然(rán)已經(jīng)有(yǒu)很多昂貴和(hé)特(tè)殊的設備(bèi)可用於(yú)柱層析，但實際上它隻(zhī)需要基(jī)本的(dí)設備即可(kě)。
蛋白層析(xī)柱可(kě)以依(yī)賴用泵將溶劑以固定流速(sù)打入填裝好的層(céng)析柱(zhù)的自動(dòng)設備來(lái)完成(chéng)或(huò)者依(yī)靠(kào)流動相的重力作用自己完成(chéng)。自(zì)動(dòng)係(xì)統或者(zhě)重力(lì)柱係(xì)統均可與自動(dòng)組(zǔ)分收(shōu)集(jí)器(qì)連(lián)接(jiē)使用。
裝柱(zhù)，上樣，平衡(héng)，洗脫，收(shōu)集，柱(zhù)再(zài)生。
（1）樣(yàng)品的(dí)選(xuǎn)擇與預(yù)處理。
（2）裝(zhuāng)柱(zhù)。將層析柱垂(chuí)直(zhí)固定，一般是先在柱內(nèi)裝入約(yuē)1/3高(gāo)度的(dí)水(shuǐ)或(huò)緩(huǎn)衝液(yè)排走(zǒu)空氣(qì)。要(yào)求柱(zhù)子(zǐ)裝的(dí)均(jūn)匀，不分層，無(wú)氣泡。
（3）平衡(héng)。用(yòng)3-5倍柱床體積的(dí)起始(shǐ)緩(huǎn)衝液(yè)走柱，使介(jiè)質(zhì)充分平衡，柱(zhù)床穩定。
（4）上樣(yàng)（加(jiā)樣）。打開層析(xī)柱下端出口，使緩衝(chōng)液(yè)流出至剛(gāng)好達(dá)到(dào)柱(zhù)麵。沿柱(zhù)壁緩慢加(jiā)入(rù)樣品，打開下(xià)端出(chū)口，使樣品溶液(yè)流出至(zhì)剛好(hǎo)達到柱(zhù)麵，再取少量起始(shǐ)緩(huǎn)衝液洗滌柱壁。加(jiā)樣時應盡量減少(shǎo)柱麵(miàn)的(dí)攪動。
（5）洗脫與收(shōu)集(jí)。打(dǎ)開起(qǐ)始(shǐ)緩衝液閥(fá)門(mén)，連(lián)續洗脫(tuō)。用(yòng)自動部分收集器自動(dòng)或手動收集(jí)，合(hé)並(bìng)同一高峰(fēng)各管。流(liú)速(sù)不(bù)宜(yí)過(guò)快且(qiě)要穩(wěn)定，洗脫液的(dí)成(chéng)分(fēn)也(yě)不應改變（凝膠溶脹(zhàng)程度），整個(gè)洗脫過(guò)程(chéng)中始終(zhōng)保(bǎo)持(chí)一定的操(cāo)作(zuò)壓，可(kě)以(yǐ)用水或(huò)緩衝液作(zuò)洗脫液(yè)。
（6）再生與(yǔ)保存。用原(yuán)始平(píng)衡液進(jìn)行充分(fēn)洗(xǐ)滌(dí)，即(jí)可重復(fù)使用。
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