蛋(dàn)白層析柱是(shì)凝(níng)膠層析技術中(zhōng)的主體(tǐ),一(yī)般用玻璃管或(huò)有機(jī)玻(bō)璃(lí)管。根據樣品混合(hé)物中(zhōng)各(gè)組分在固(gù)定(dìng)相(xiāng)和(hé)流動相中(zhōng)分配(pèi)係數不同,從而分離(lí)的一種層析(xī)法。
(1)裝(zhuāng)柱(zhù)前(qián)要仔細(xì)看(kàn)填料(liào)的使用說(shuō)明書,每種(zhǒng)填料都(dū)有(yǒu)自己的(dí)特性,以(yǐ)及特(tè)殊(shū)的(dí)裝(zhuāng)柱(zhù)方(fāng)法(fǎ),針(zhēn)對不(bù)同(tóng)的(dí)空柱(zhù),也要(yào)注意(yì)方法(fǎ)可(kě)能不同,這一(yī)點非(fēi)常重(zhòng)要:裝柱(zhù)包(bāo)括以後(hòu)使用中不允許柱(zhù)內進入(rù)氣泡(bubblefree),柱(zhù)頭事(shì)先也(yě)要排除(chú)氣泡。
(2)填料要(yào)加水(shuǐ)攪拌成均匀(yún)懸液,懸液濃度(dù)依填料而不同,一般70-85%,迅速(sù)倒入空柱(zhù)內(nèi),或吸或壓(yā),流速(sù)和具體(tǐ)步(bù)驟(zhòu)看(kàn)說明書。
(3)所(suǒ)有柱子盡量(liáng)做到填(tián)料(liào)均(jūn)匀(yún),尤(yóu)其(qí)是(shì)用於(yú)凝膠層析的(dí)柱(zhù)子。裝柱完成後(hòu),可用柱效(xiào)測定的(dí)方法(fǎ)檢查(chá)裝(zhuāng)填(tián)效(xiào)果(guǒ)。一(yī)個(gè)裝(zhuāng)填(tián)合(hé)格的(dí)柱子(zǐ)的(dí)理(lǐ)論(lùn)塔(tǎ)板高度(dù)應(yīng)是填料平均粒徑的(dí)2-4倍,在(zài)此範圍內越(yuè)小越好。
(4)選擇合適的(dí)泵,盡(jìn)量(liáng)流速滿足要求(qiú),脈衝盡(jìn)量(liáng)小。選柱塞泵(bèng)。
(5)準備(bèi)上柱的液體(tǐ)應進行過(guò)濾(lǜ),至(zhì)少(shǎo)是(shì)0.45micrometre。
(6)關於純(chún)化,首先要考慮的是(shì)你(nǐ)的(dí)目標(biāo):純(chún)度(dù),數(shù)量(liáng),速度(dù),收(shōu)率等(děng)等,再根(gēn)據樣品(pǐn)的具體情況,尤其(qí)是目標(biāo)蛋白的性質,確(què)定純化(huà)策(cè)略(lüè)。
(7)至於蛋(dàn)白(bái)層析(xī)柱(zhù)測序,大(dà)概(gài)不(bù)到1mg應該足夠了。
