蛋白(bái)層(céng)析(xī)柱是凝膠層析(xī)技(jì)術中的(dí)主體(tǐ)，一般用玻(bō)璃(lí)管(guǎn)或(huò)有(yǒu)機(jī)玻(bō)璃管。層析柱的直徑大(dà)小不(bù)影響分離(lí)度，樣品用量大，可加大柱(zhù)的直(zhí)徑(jìng)，一般製備(bèi)用凝(níng)膠柱，直徑(jìng)大(dà)於2厘米(mǐ)，但在加樣時應將樣品(pǐn)均匀分布於凝(níng)膠(jiāo)柱床麵上。此外，直徑(jìng)加大，洗脫液體(tǐ)體(tǐ)積增大，樣(yàng)品(pǐn)稀釋度(dù)大。分(fēn)離度取決於(yú)柱高，為(wéi)分離不(bù)同組(zǔ)分，凝(níng)膠(jiāo)柱床(chuáng)必須(xū)有(yǒu)適(shì)宜的(dí)高度，分(fēn)離度與(yǔ)柱(zhù)高的平方根相關，但(dàn)由(yóu)於軟(ruǎn)凝(níng)膠柱(zhù)過高擠(jǐ)壓(yā)變(biàn)形(xíng)阻塞(sāi)，一(yī)般不超過1米。
蛋(dàn)白(bái)層析柱(zhù)的(dí)工作(zuò)原理
1.預處理(lǐ)：在吸(xī)附樹脂(zhī)的生(shēng)產(chǎn)過(guò)程中，一(yī)般(bān)采用的(dí)是工(gōng)業級(jí)原(yuán)料，產(chǎn)品沒(méi)有經過進(jìn)一步純化(huà)處理(lǐ)，樹(shù)脂內(nèi)部(bù)殘留(liú)少量單(dān)體(tǐ)，所(suǒ)以(yǐ)在(zài)使用之(zhī)前(qián)，需(xū)用水(shuǐ)溶性溶劑對其(qí)浸泡處(chǔ)理，然(rán)後用去(qù)離(lí)子水(shuǐ)通過樹脂層(céng)，置換出水溶性溶(róng)劑(jì)離(lí)子方可(kě)投入使(shǐ)用(yòng)。
2.逆(nì)流(liú)洗(xǐ)柱(zhù)：用(yòng)水洗出(chū)去水離(lí)子及(jí)破(pò)碎(suì)填(tián)料(liào)，樹(shù)脂裝入後，用蒸(zhēng)餾水(shuǐ)反洗樹脂層(céng)，直至(zhì)出(chū)水清晰(xī)，無氣味，無細碎樹脂(zhī)為止。再依(yī)次用(yòng)酸(suān)鹼等(děng)浸(jìn)泡(pào)，衝洗(xǐ)樹(shù)脂層(céng)，至(zhì)出(chū)水呈(chéng)中性為(wéi)止(zhǐ)。
3.水洗：水(shuǐ)洗的主(zhǔ)要目的(dí)是(shì)除去層析柱上(shàng)所(suǒ)附著的(dí)渣(zhā)滓。
4.吸(xī)附(fù)：吸(xī)附(fù)操(cāo)作(zuò)自上而下(或自下而上)通(tōng)液，可采(cǎi)用(yòng)不(bù)同(tóng)流速，以選取*條(tiáo)件(jiàn)。流出(chū)液每隔一段(duàn)時間(jiān)取(qǔ)樣檢(jiǎn)測，達(dá)泄(xiè)漏點停止吸(xī)附，或(huò)多柱串聯(lián)達飽和後解吸。吸(xī)附(fù)主要是吸取料液中(zhōng)的渣滓或要(yào)回(huí)收物(wù)，該過程(chéng)應控(kòng)製料液(yè)的速度(dù)及吸附量，大孔樹(shù)脂(zhī)應(yīng)*浸泡(pào)在(zài)料(liào)液(yè)裏(lǐ)，以提高(gāo)吸附(fù)效(xiào)果(guǒ)和(hé)運行穩(wěn)定性(xìng)。
5.解吸，再生(shēng)：解吸操(cāo)作自上(shàng)而(ér)下(或自(zì)下而上)通(tōng)解(jiě)吸(xī)劑(jì)，單柱吸附(fù)時(shí)，解吸與吸(xī)附操作(zuò)對(duì)流(liú)為(wéi)佳(jiā)。解吸劑(jì)沸點要(yào)低以(yǐ)便回收處理。
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