蛋白(bái)層(céng)析柱一般用(yòng)於純(chún)化蛋白(bái)質(zhì)和(hé)核(hé)酸(suān)等大(dà)分(fēn)子物(wù)質(zhì)的(dí)方法的(dí)主(zhǔ)要依(yī)據是各種大分(fēn)子(zǐ)物(wù)質(zhì)之(zhī)間(jiān)理(lǐ)化(huà)特性的差異(yì)性。親(qīn)和(hé)層(céng)析純化(huà)生(shēng)物(wù)大分子通(tōng)常采(cǎi)用(yòng)柱層析(xī)的(dí)方(fāng)法。親(qīn)和層析(xī)柱(zhù)一般很短(duǎn)，通常10cm左(zuǒ)右。上(shàng)樣時(shí)應注意(yì)選(xuǎn)擇(zé)適當(dāng)的條件，包(bāo)括(kuò)上樣流(liú)速(sù)，緩衝液種類(lèi)，pH，離子強(qiáng)度(dù)，溫度等(děng)，以(yǐ)使(shǐ)待分(fēn)離(lí)的物(wù)質能(néng)夠(gòu)充分(fēn)結(jié)合(hé)在親(qīn)和(hé)吸附(fù)劑(jì)上。
生物(wù)大分(fēn)子和(hé)配(pèi)體(tǐ)之(zhī)間達(dá)到平衡的(dí)速(sù)度很慢(màn)，所以樣品液(yè)的濃(nóng)度(dù)不(bù)易(yì)過(guò)高，上樣時(shí)流(liú)速(sù)應比較慢，以保(bǎo)證樣品(pǐn)和親(qīn)和(hé)吸附劑(jì)有充分的接(jiē)觸(chù)時(shí)間進(jìn)行吸附(fù)。當配體(tǐ)和待(dài)分(fēn)離的(dí)生物(wù)大分子的親(qīn)和力比(bǐ)較(jiào)小或樣品濃度較高，雜(zá)質較多時，可以在上樣後停止(zhǐ)流(liú)動(dòng)，讓樣(yàng)品(pǐn)在層析柱中(zhōng)反應一段(duàn)時(shí)間，或者將(jiāng)上樣後流出(chū)液(yè)進行二(èr)次上(shàng)樣，以(yǐ)增加吸附(fù)量(liáng)。
樣品(pǐn)緩衝液(yè)的選(xuǎn)擇(zé)也是要使待分(fēn)離(lí)的生物大分子與配體有較(jiào)強的(dí)親和力。另外樣品緩(huǎn)衝液中(zhōng)一(yī)般有一(yī)定的(dí)的離子(zǐ)強度，以(yǐ)減(jiǎn)小(xiǎo)基質，配體與樣品其它(tā)組分(fēn)之間(jiān)的(dí)非(fēi)特(tè)異性(xìng)吸(xī)附。
層(céng)析(xī)柱(zhù)的柱(zhù)效(xiào)測(cè)定(dìng)是(shì)在純化實(shí)驗中(zhōng)非常重要(yào)的步驟(zhòu)，也是我們(mén)得到準(zhǔn)確結(jié)果(guǒ)的保證(zhèng)。如果您(nín)是自(zì)己(jǐ)裝柱，建議(yì)您(nín)在(zài)使用前(qián)先做(zuò)柱效(xiào)測定(dìng)來(lái)確定(dìng)柱(zhù)子的效(xiào)果。另(lìng)外，當(dāng)層(céng)析柱使(shǐ)用(yòng)過一定次數，或者發生實驗結果異(yì)常，柱子(zǐ)進入氣泡，超(chāo)壓(yā)等問題，我們(mén)也可(kě)以(yǐ)對柱(zhù)子(zǐ)進(jìn)行柱(zhù)效測定(dìng)來(lái)判斷(duàn)柱(zhù)效是否正(zhèng)常。
蛋白(bái)層析柱的柱效測定標準：
柱效測(cè)定主要通(tōng)過(guò)計(jì)算理論踏板高(gāo)度（HETP）和(hé)對(duì)稱性（As）來確(què)定，Pulsetest是目前常(cháng)用的(dí)測試方法(fǎ)，即(jí)使(shǐ)用少(shǎo)量的樣品(pǐn)流經(jīng)裝填(tián)好的層析柱(zhù)中，通過儀器(qì)上(shàng)的(dí)檢(jiǎn)測(cè)器檢測實(shí)驗過程(chéng)，實驗結束後(hòu)對洗脫峰進行分(fēn)析(xī)。
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